جداسازی و کشت قارچ ها از این رو حائز اهمیت است که عفونت های قارچی در انسان به شکل های متفاوتی همچون انواع کچلی ها تا عفونت های منتشره قابل بررسی می باشد. با افزایش سندرم های نقص ایمنی و همچنین استفاده از داروهای سرکوبگر سیستم ایمنی و تغییر عادات زندگی، عفونت های قارچی شروع به زیاد شدن کردند که یکی از مهم ترین مثال های آن شیوع قارچ سیاه (موکورومایکوزیس) در بین بیماران کووید۱۹ که تحت درمان با داروهای سرکوبگر سیستم ایمنی بودند، می باشد.

✔️هرچند که استفاده از داروهای ضد قارچی تا میزان زیادی در کنترل این نوع عفونت ها نقش ایفا کرده است اما نحوه تشخیص دقیق و ردیابی زودهنگام این نوع درگیری میتواند در تسریع و موفقیت روند درمان نقش ویژه ای داشته باشد. لذا در این متن روش های مهم در جداسازی و کشت قارچ ها را بررسی میگردد.

✔️مشاهده مستقیم نمونه آلوده به قارچ از چندین جهت از اهمیت بسیار بالایی برخوردار است، چرا که رشد قارچ در محیط کشت با سرعت پائینی انجام می شود و این باعث می شود که با یک رنگ آمیزی سریع  بتوان یک گزارش سریع به پزشک داد که یقینا سریع شدن درمان را در پی دارد. برخی مواقع بررسی خصوصیات مورفولوژیک قارچی در نمونه رنگ آمیزی شده می تواند شاهدی برای تشخیص قطعی قارچ مورد نظر باشد.

✔️پس می توان نتیجه گرفت که رنگ آمیزی و مشاهده مستقیم قارچ علاوه بر اینکه به پزشک برای درمان کمک می کند، می تواند به پرسنل آزمایشگاه میکروبیولوژی نیز در تشخیص صحیح ارگانیسم کمک می کند. یکی دیگر از فواید رنگ آمیزی مستقیم بررسی سلول های التهابی و تجمع آنهاست که حتی در صورتی که قارچ دیده نشود نشان دهنده عفونت است.

◀️آماده سازی KOH با رنگ کالکوفلورسفید

✔️از آماده سازی توسط پتاسیم هیدروکسید (KOH) برای ردیابی عناصر قارچی در طیف وسیعی از نمونه بالینی همچون پوست، ناخن، مو، خلط، ادرار تغلیظ شده و بافت استفاده نمود.

✔️برای این کار از %۱۰-۲۰ KOH به همراه نمونه مورد نظر بر روی لام قرار داده و یک لامل نیز بر روی نمونه قرار داده می شود. سپس لام توسط میکروسکوپ نوری با عدسی ۱۰X (LPF) مشاهده می نمائیم. پتاسیم هیدروکسید با حل نمودن کراتین و سایر مواد سلولی مشاهده ساختارهای قارچی را ممکن می سازد.

✔️رنگ کالکفلور سفید به عنوان یک رنگ فلورسنت به همراه KOH منجر به مشاهده مناسب نمونه قارچی می شود. رنگ فلورسنت کالکفلور سفید با اتصال به پلی ساکارید های دیواره قارچی و ایجاد رنگ سفید-آبی و یا سبز (بسته به نوع فیلترهای میکروسکوپ) منجر به دیده شدن قارچ می شود.

◀️رنگ آمیزی جوهر هندی (India Ink)

✔️به صورت سنتی، استفاده از جوهر هندی برای بررسی مایع مغزی-نخاعی (CSF) و سایر مایعات استریل بدن به منظور ردیابی مخمرهای دارای کپسول همچون کریپتوکوک نئوفورمانس استفاده شده است. یک قطره از جوهر هندی به همراه یک قطره از رسوب سانتریفیوژ شده ی نمونه بالینی کافی است تا ارگانیسم کپسول دار زیر میکروسکوپ نوری دیده شود. مخمرهایی که در CSF با کپسول بزرگی پوشانده شده اند نشان دهنده درگیری بیمار با مننژیت ناشی از کریپتوکوک نئوفورمانس می باشد.

◀️تست آنتی ژنی کریپتوکوکال

✔️هر چند که فقط ۵۰% از بیماران مبتلا به مننژیت کریپتوکوک نئوفورمانس در رنگ آمیزی توسط جوهر هندی مثبت گزارش می شوند، برای حل این مشکل در بسیاری از آزمایشگاه ها تست بررسی آنتی ژن کریپتوکوکال جایگزین روش قدیمی جوهر هندی شده است. از تست ردیابی آنتی ژن کریپتوکوکال برای بررسی آنتی ژن پلی ساکاریدی کپسول کریپتوکوک نئوفورمانس در رسوب CSF و سرم خون استفاده می نمایند.

◀️سایر روش های رنگ آمیزی

👈رنگ آمیزی گرم: این روش برای رنگ آمیزی باکتری ها استفاده می شود و در صورت وجود قارچ در نمونه می توان آن را نیز مشاهده نمود.

👈رنگ آمیزی اسید-فست: از این رنگ آمیزی که برای مشاهده مایکوباکتریوم ها استفاده می شود می توان برای مشاهده بلاستومایسس درماتیدیس را نیز فراهم نمود.

👈رنگ آمیزی پاپانیکولا: بیشترین استفاده از پاپانیکولا در مشاهده بدخیمی های سلولی است، در رنگ آمیزی پاپانیکولا نیز می توان عناصر قارچی را مشاهده نمود.

👈رنگ آمیزی رایت Wright: از این رنگ آمیزی به صورت روتین برای رنگ آمیزی خون محیطی و آسپیره مغز استخوان استفاده می شود. از این رنگ آمیزی برای مشاهده هیستوپلاسما کپسولاتوم و کریپتوکوک نئوفورمانس می توان استفاده نمود.



تاریخ انتشار: 20:10:41 1403/03/27